熒光光度法測定影響熒光強度的外部因素
1)溫度 溫度降低,熒光效率和熒光強度升高。
2)溶劑 隨著(zhù)溶劑的極性的增加,熒光物質(zhì)的π→π* 躍遷幾率增加,熒光強度將增強,熒光波長(cháng)也 發(fā)生紅移;溶劑粘度降低,熒光強度降低;溶 劑應達到足夠的純度。 化學(xué)工程與現代材料學(xué)院
3)pH值 ?具酸或堿性基團的熒光物質(zhì),在不同pH值時(shí),其 結構可能發(fā)生變化,因而熒光強度將發(fā)生改變。 NH3+ OHH+ NH2 OHH+ NH- ?利用金屬離子與有機試劑生成配合物進(jìn)行測定金 屬離子時(shí),配合物的穩定性和組成受溶液pH值影 響較大,從而影響到它們的熒光性質(zhì)。 Ga3++鄰-二羥基偶氮苯 Ga3++鄰-二羥基偶氮苯 化學(xué)工程與現代材料學(xué)院 pH 3~4 pH 6~7 1:1配合物(產(chǎn)生熒光) 1:2配合物(不產(chǎn)生熒光)
4)散射光 瑞利散射光(Rayleigh scattering light):光子與物 質(zhì)分子發(fā)生彈性碰撞,不發(fā)生能量交換,運動(dòng)方 向改變;λ瑞利光=λ入射光 拉曼散射光(Raman scattering light) :光子與物 質(zhì)分子發(fā)生非彈性碰撞,發(fā)生能量交換,運動(dòng)方 向改變;λ拉曼光≠λ入射光 消除方法:選擇適當的激發(fā)波長(cháng) 化學(xué)工程與現代材料學(xué)院 448 320 a.強度 360 激發(fā) 320nm 硫酸奎寧 448 350 激發(fā) 350nm 硫酸奎寧 b.強度 320 激發(fā) 320nm 0.1mol/L硫酸 360 350 激發(fā) 350nm 0.1mol/L硫酸 400 硫酸奎寧在不同激發(fā)波長(cháng)下的熒光
(a)與拉曼光譜(b) 化學(xué)工程與現代材料學(xué)院 在不同波長(cháng)激發(fā)光下主要溶劑的拉曼光波長(cháng)(nm) 溶劑 水 乙 醇 環(huán)己烷 CCl4 CHCl3 248 271 267 267 — — 激發(fā)光(nm) 313 365 405 350 416 469 344 409 459 344 408 458 320 375 418 346 410 461 436 511 500 499 450 502 化學(xué)工程與現代材料學(xué)院
5) 熒光熄滅 熒光熄滅(熒光猝滅):熒光物質(zhì)分子與溶劑分 子或其他溶質(zhì)分子的相互作用引起熒光強度降低 的現象稱(chēng)為熒光熄滅。 熒光熄滅劑:能引起熒光熄滅的物質(zhì)。 導致熒光熄滅的原因: ?碰撞猝滅 M+hv→M*,M*+Q → M+熱 ?靜態(tài)猝滅 M+Q → MQ 非熒光物質(zhì) ?轉入三重態(tài)的猝滅 三重態(tài) ?熒光物質(zhì)的自猝滅 熒光物質(zhì)濃度較高 ?氧的熄滅作用 化學(xué)工程與現代材料學(xué)院 熒光熄滅法: 熒光物質(zhì)加入某種熄滅劑后,其熒 光強度的減少與熒光熄滅劑的濃度呈線(xiàn)性關(guān)系, 可用于測定熄滅劑的含量,這種方法稱(chēng)為熒光熄滅法。
酶制劑相關(guān)產(chǎn)品:
因 酶制劑產(chǎn)品眾多,如:過(guò)氧化氫酶 粉末、α-葡萄糖苷酶,詳情進(jìn)入酶制劑產(chǎn)品頁(yè)
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